8-4. T7 RNAポリメラーゼによる発現系

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1) pETベクター

pETベクターは本来のアミノ酸配列をもったタンパク質の発現に使われる

このベクターを利用する場合、目的のcDNAの翻訳開始ATG配列を人為的に変異させてNde Iとコード領域下流部分の適当な部位で切り出し、ベクターに挿入することができる

挿入遺伝子の自前の開始ATGコドンから翻訳が始まる

2) 発現制御系：pETシステム

pETベクターを使う大腸菌は、タンパク質分解酵素活性の少ないBL21株で、ゲノムにあらかじめ組込まれているT7RNAポリメラーゼを発現させることができる

発現はlacIとlacUV5プロモーターの支配を受けるが、通常はlacIによりプロモーターは抑制されている

IPTGを加えて誘導すると、lacUV5プロモーターが働いてT7RNAポリメラーゼが細胞内でつくられ、それがpETベクター上のプロモーターに結合して目的cDNAが発現し、結果的にタンパク質が産生される

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pETベクターには、lacIとT7プロモーター下流にlacオペレーターをもち、非誘導時のタンパク質産生を最小限に抑える改良型もある